December 11, 2011

Pemeriksaan Mikrobiologi (Swab Test) terhadap Mesin Produksi secara Kualitatif



Swab Test ditujukan untuk memeriksa permukaan dan menentukan konsentrasi tinggi residu aktif yang tidak mudah terdeteksi oleh inspeksi visual. Swab test memiliki keunggulan, yaitu kontaminan yang terdeteksi menandakan bahwa pembersihan kurang cukup, sehingga perlu pembersihan ulang. 

Swab artinya menyeka, merupakan suatu alat yang dapat dibuat dari sebatang lidi dan kapas yang di puntal kayak cotton bud, tapi jangan pake cottton bud ya karena bisa leyot kalo kena panas 121 C, jadi harus pake lidi kalo gak beli kit nya. Udah gitu tu swab di steril ya.

Medium yang digunakan untuk inokulasi adalah Lactose Broth. LB untuk perbanyakan Salmonella dan bakteri coliform dari makanan, air susu, dan produk farmasi. 

Ringkasan
LB sering digunakan sebagai media pra-pengayaan ketika pengujian makanan dan produk susu untuk Salmonella spp. Dalam makanan kering atau diolah, spesies Salmonella dapat sublethally terluka dan dalam jumlah yang rendah. Kehadiran lain bakteri serta komponen dari sampel makanan dapat menghambat pertumbuhan dan pemulihan Salmonella. Pra-pengayaan dalam media nonselektif seperti LB memungkinkan untuk perbaikan kerusakan sel, mengencerkan zat beracun atau inhibisi, dan
memberikan keuntungan nutrisi Salmonella lebih dari bakteri lain
.

LB secara luas digunakan dan termasuk banyak digunakan untuk prosedur pengujian makanan, produk susu dan bahan lainnya. LB juga digunakan untuk mendeteksi organisme coliform dalam air, produk susu, dan bahan lainnya.

Prinsip Kerja
Enzymatic Digest of Gelatin dan Ekstrak Daging Sapi menyediakan karbon dan sumber nitrogen untuk pertumbuhan umum mikroorganisme. Laktosa merupakan sumber karbohidrat. Fermentasi laktosa ditunjukkan oleh produksi gas.

Formula / Liter :
Intisari dari Gelatin enzimatik .............................................. ........ 5 g
Ekstrak Daging Sapi ....................................................................3 g
Laktosa ................................................. .....................................5 g
pH akhir : 6,9 ± 0,2 pada 25 ° C

Cara kerja :
1. Larutkan 13 g menengah dalam satu liter air murni.
2. Aduk rata.
3. Bagikan ke tabung uji yang berisi tabung Durham.
4. Autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.
Warna media di tabung reaksi : pucat terhadap cahaya kuning dan jelas dengan tidak untuk cahaya endapan.
Inkubasi pada 35 ± 2 ° C dan diperiksa untuk pertumbuhan setelah 1 - 2 hari inkubasi.
Hasil - Gas - Pertumbuhan
Enterococcus faecalis ATCC 19433 10 - 300 - Negatif - Baik
Escherichia coli ATCC 25922 10 - 300 - Positif - Baik
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 10 - 300 - Positif - Baik
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 10 - 300 - Miskin sampai Lumayan - Adil
Salmonella typhimurium ATCC 14028 10 - 300 - Negatif - Baik

Uji Prosedur
LB digunakan dalam tahap pra-pengayaan dari persiapan sampel makanan untuk isolasi Salmonella spp.


1. Mentransfer g 25 atau 25 mL sampel bahan uji ke dalam wadah. Tambahkan 225 ml LB steril.
Campuran yang diperlukan untuk membuat suspensi homogen.Inkubasi pada 35 ° C selama 24 jam.
2. Transfer 1 mL suspensi untuk kaldu pengayaan yang sesuai, seperti Cairan Tetrathionate dan Selenite sistin (SC). Inkubasi pada 35 ° C selama 24 jam.
3. Transfer loopful suspensi untuk tepat media agar-agar selektif, seperti Agar Hektoen enterik, Agar XLD dan Bismut Agar sulfit. Inkubasi pada 35 ° C selama 24 jam.
Hasil
Pra-pengayaan, pengayaan selektif dan plating selektif meningkatkan kemungkinan mengisolasi  Salmonella dari makanan dan bahan lainnya.

Keterbatasan Prosedur
Karena variasi nutrisi, beberapa strain mungkin ditemui yang tumbuh buruk atau gagal untuk tumbuh pada media ini.

BTW data di atas itu gak untuk uji swab yang untuk alat produksi y, sebentar sebentar gini loh, kan lidi berkapas itu udah steril, kemudian secara aseptis lidi ajaib tersebut kita usapkan di permukaan mesin sampe semua kapas kena permukaan mesin. Kemudian diamankan untuk inokulasi di lactose broth. Kemudian inokulasikan lidi ajaib tersebut di dalam tabung reaksi berisi lidi ajaib dan LB + durham tersebut, inkubasi 48 jam 37 C. Tabung yang positif gas kemudian dipisah dari yang negatif, selanjutnya tanam di medium cair BGLB (Brilliant Green Bile Broth).

Brilliant Green Bile Broth 2 % (BGLB) digunakan untuk mendeteksi bakteri coliform dalam air, makanan, dan produk susu.

Ringkasan
Kelompok bakteri koliform termasuk fakultatif anaerob dan aerob, Gram-negatif, non-sporeforming basil yang memfermentasi laktosa dan membentuk asam dan gas pada 35 ° C dalam 48 jam. Anggota Enterobacteriacae yang mayoritas terdiri dari kelompok ini, tetapi organisme seperti Aeromonas spp. juga dapat dimasukkan. Prosedur untuk mendeteksi dan mengkonfirmasi koliform digunakan dalam pengujian air, makanan, produk susu dan lainnya materials.BGLB 2% digunakan untuk mengkonfirmasi hasil tes positif dugaan hasil dari Lactose Broth.

Prinsip Prosedur
Enzymatic Digest of Gelatin adalah sumber karbon dan nitrogen, digunakan untuk kebutuhan pertumbuhan umum bakteri di BGLB 2%. Hijau Oxbile dan Brilliant menghambat bakteri Gram-positif dan banyak bakteri Gram-negatif, selain coliform. Laktosa merupakan sumber karbohidrat. Bakteri yang memfermentasi laktosa dan menghasilkan gas terdeteksi.

Formula / Liter :
Intisari dari Gelatin enzimatik .............................................. ...... 10 g
Laktosa ................................................. .................................. 10 g
Oxbile ................................................. ..................................... 20 g
Brilliant Hijau ................................................ ..................... 0,0133 g
pH akhir : 7,2 ± 0,2 pada 25 ° C

Cara kerja :
1. Larutkan 40 g menengah dalam satu liter air murni sampai merata.
2. Panas dengan agitasi untuk sepenuhnya melarutkan medium.
3. Bagikan ke tabung fermentasi.
4. Autoclave pada 121 ° C selama tidak lebih dari 15 menit.Untuk menghindari jebakan gelembung dalam tabung fermentasi, autoklaf memungkinkan untuk mendinginkan setidaknya 75 ° C sebelum pembukaan.

Penampilan Dehidrasi (serbuk) : hijau-krem.
  • Penampilan steril (1X): media berwarna zamrud hijau dan jelas dengan tidak mengendapkan cahaya.
  • Penampilan steril (2X): media berwarna hijau sangat gelap dengan highlight cokelat dan jelas, dengan tidak untuk mengendapkan cahaya
Inkubasi pada suhu atmosfer yang tepat dan sebuah diperiksa untuk pertumbuhan pada 18 - 48 jam.
Pertumbuhan - Gas
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 10-300 - Baik sampai yang sangat baik - Positif
Enterococcus faecalis ATCC 29212 ~ 1000 - Ditandai untuk menyelesaikan penghambatan - Negatif
Escherichia coli ATCC 25922 10-300 - Baik sampai yang sangat baik - Positif
Staphylococcus aureus ATCC 25923 ~ 1000 - Ditandai untuk menyelesaikan penghambatan- Negatif

Uji Prosedur
Lihat referensi yang sesuai untuk instruksi spesifik untuk bahan yang sedang diuji.
1. Subkultur dari spesimen dugaan koliform positif dalam Lactose Broth pada BGLB 2%.
2. Inkubasi pada 35 ° C selama 48 jam
3. Periksa untuk gelembung (gas) dalam tabung fermentasi.
Hasil
Positif: Gelembung (gas) dalam tabung fermentasi.
Negatif: Tidak ada gelembung (gas) dalam tabung fermentasi.

Batasan Prosedur
Karena kebutuhan gizi yang berbeda-beda, beberapa strain mungkin ditemui yang tumbuh buruk atau gagal untuk tumbuh pada media ini.

Kemudian jika gas positif dilanjut uji penegasan lagi menggunakan medium Tergitol (TGT) Agar secara goresan di petri.

Tergitol 7 (TGT) Agar digunakan untuk isolasi selektif bakteri koliform. Tergitol Agar adalah selektif untuk Escherichia coli dan anggota kelompok koliform.

SEJARAH
Pada tahun 1946, Pollard menunjukkan aksi bakterisidal Tergitol 7 terhadap bakteri Gram-positif. Penambahan Tergitol 7 ke media yang terdiri dari polypeptone dan ekstrak ragi meningkaatkan semua bakteri coliform, dan menghambat Gram-negatif pembentuk spora dan organisme Gram-positif. Para
ahli kemudian dikembangkan oleh Chapman, yang penghitungan bakteri koliform adalah sekitar 30%
lebih tinggi daripada yang dilakukan pada media selektif lainnya.Rumus tersebut kemudian dimodifikasi oleh penulis yang Chapman dengan menambahkan TTC (triphenyltetrazolium klorida), yang berguna untuk pengakuan cepat (dalam pengenalan dini dan identifikasi Escherichia coli)Escherichia coli dan Enterobacter aerogenes  menghasilkan koloni kuning dikelilingi oleh halo kuning, sementara bakteri Gram-negatif (termasuk Proteus dan Pseudomonas) lainnya memberikan koloni merah gelap.

PRINSIP
- Tergitol 7 menghambat bakteri Gram-positif, batas invasi oleh Proteus dan pemulihan bakteri koliform.
- Bakteri Coliform membentuk koloni yang kuning atau oranye di dalam lingkaran kuning. Hasil halo dari
pengasaman laktosa bawah filter membran dengan adanya indikator berwarna,bromthymol biru.

- Strain lainnya membentuk koloni yang warna merah adalah karena pengurangan TTC untuk formazan larut.
- Bakteri yang tidak memfermentasi laktosa membentuk koloni yang dikelilingi oleh lingkaran cahaya biru.

PERSIAPAN
- Suspend 51,1 g menengah dehidrasi (BK123) dalam 1 liter air suling atau deionisasi.
- Perlahan-lahan  mendidih, aduk perlahan sampai pencampuran sempurna.
- Dispense 100 ml dalam botol.
- Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

INSTRUKSI UNTUK PENGGUNAAN
- Dinginkan dan mempertahankan media pada 44-47 ° C.
- Secara aseptik tambahkan 1 mL tambahan TTC 12,5 mg yang dilarutkan per botol.
- Menghomogenkan secara menyeluruh.
- Tuang ke dalam cawan Petri steril (lapisan agar-agar harus 5 mm tebal).
- Biarkan membeku pada permukaan yang dingin.
- Lakukan inokulasi dengann teknik streak.
- Inkubasi pada 36 ° C selama24 jam 


Enzymatic Digest of Casein and Enzymatic Digest of Animal Tissue merupakan sumber nitrogen dan mineral
Tergitol 7 Agar. Ekstrak Ragi merupakan persediaan vitamin esensial. Laktosa adalah karbohidrat yang difermentasi. Laktosa yang difermentasi ditandai oleh perubahan warna indikator pH, Bromthymol Biru. Tergitol 7 (natrium sulfat heptadecyl) menghambat pertumbuhan mikroorganisme Gram-positif, bakteri pembentuk spora Gram-negatif,dan dipenuhi dari Proteus spp. Agar-agar agen yang memperkuat.

Ketika TTC ditambahkan dalam medium, TTC berfungsi sebagai indikator dari pertumbuhan bakteri. TTC secara cepat mereduksi red formazan yang tidak larut oleh banyak mikroorganisme. Mikroorganisme yang memfermentasi laktosa secara terus menyediakan warna kuning untuk koloni sampai kuning kehijauan. Bakteri non fermentasi laktosa tampak merah karena serapan dan pengurangan/reduksi TTC.

Formula / Liter :
Intisari dari Kasein enzimatik .............................................. ..... 2,5 g
Intisari dari Jaringan enzimatik Hewan ........................................2,5 g
Ekstrak Ragi ................................................ ............................. 3 g
Laktosa ................................................. .................................. 10 g
Tergitol 7 ................................................ ................................ 0,1 g
Bromthymol Biru ................................................ ................ 0,025 g
Agar ................................................. ....................................... 15 g
pH akhir : 6,9 ± 0,2 pada 25 C

Cara kerja :
1. Campur 33 g menengah dalam satu liter air murni.
2. Panasi dengan agitasi dan mendidihkan selama satu menit untuk benar-benar melarutkan medium.
3. Autoclave pada 121 C selama 15 menit.

Inkubasi pada 35 C dan diperiksa untuk pertumbuhan setelah 18 - 24 jam.

Pertumbuhan - Warna koloni TANPA TTC - Warna koloni DENGAN TTC
Enterobacter aerogenes ATCC13048 (10 - 300) - koloni kuning - koloni merah
Enterococcus faecalis ATCC29212 103 - koloni kuning kehijauan - dihambat
Escherichia coli ATCC 25922 10 - 300 - koloni kuning - pusat koloni oranye
Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 10 - 300 -  dihambat
Salmonella typhimurium ATCC 14028 10 - 300 - koloni biru - koloni biru
Staphylococcus aureus ATCC 25923 103 - dihambat

Uji Prosedur
Dengan tidak adanya TTC, E. coli menghasilkan koloni kuning dengan lingkaran cahaya kuning; coliform lain menghasilkan koloni warna kuning sampai kuning-hijau. Bakteri non-fermentor menghasilkan koloni biru. Dengan menambahkan TTC, E. coli menghasilkan koloni kuning, coliform lain menghasilkan koloni kuning-hijau, sementara non-fermentor menghasilkan koloni merah.


Keterbatasan Prosedur
1. Beberapa strain mungkin ditemui yang tumbuh buruk atau gagal untuk tumbuh pada media ini.
2. Tuangan piring tidak memberikan hasil yang memuaskan.
3. Biarkan petri mengering dengan tutup sedikit terbuka selama 1 - 2 jam.
4. Pengurangan TTC adalah reaksi ireversibel yang menghasilkan senyawa formazan larut.

PENGENDALIAN KUALITAS
- Warna serbuk : beige menjadi bubuk kehijauan
- Warna medium : biru-hijau agar-agar.

Koloni yang disangka kemudian di tanam di media triple sugar iron agar (TSI), SIM (Sulfite Indole Motility), dan SC (Simmons Citrate). 

TSI adalah medium diferensial yangmengandung laktosa, sukrosa, sejumlah kecil glukosa (dekstrosa), sulfat besi, dan indikator pH merah fenol. Hal ini digunakan untuk membedakan enterics berdasarkan kemampuan untuk mengurangi karbohidrat dan fermentasi sulfur.
Seperti dengan cairan fermentasi fenol merah, jika organisme dapat memfermentasi salah satu dari tiga gula yang hadir dalam medium, medium akan berubah kuning. Jika suatu organisme hanya dapat memfermentasi dekstrosa, jumlah kecil dekstrosa dalam medium yang digunakan oleh organisme dalam sepuluh jam pertama inkubasi. Setelah itu, reaksi yang menghasilkan asam beralih di bidang aerobik miring, dan menengah didaerah tersebut berubah warna menjadi merah, menunjukkankondisi basa. Daerah anaerobik miring, seperti pantat, tidak akan kembali ke keadaan alkali, dan mereka akan tetap kuning.Hal ini terjadi dengan Salmonella dan Shigella.
CATATAN:
SIM menengah harus dibaca setelah inkubasi hanya 24 jam karena waktu inkubasi yang lebih lama dapat menyebabkannegatif palsu. Fermentor kuat seperti Escherichia coli dan Entrobacter cloacae akan memfermentasi semua gula yang tersedia dan kemudian mulai menggunakan asam amino. Ini akan menghasilkan kelompok amina dan menyebabkan medium untuk mengubah alkali.
Jika organisme dapat mengurangi belerang, gas hidrogensulfida yang dihasilkan akan bereaksi dengan besi untuk membentuk besi sulfida, yang muncul sebagai endapan hitam.Jika endapan terbentuk, dapat masker setiap asam / alkalihasil. Pengurangan sulfur memerlukan lingkungan yang asam,sehingga jika endapan hitam hadir, fermentasi beberapaterjadi. Jika gagang miring ini dikaburkan oleh endapan, lihat di bagian atas miring untuk menentukan apakah organismefermentasi dekstrosa bisa saja (merah), atau jika dapatmemfermentasi laktosa baik dan / atau sukrosa (kuning).
Jika fermentasi menghasilkan gas, Anda mungkin melihat celahdalam medium, atau seluruh kemiringan dapat dinaikkan di atas bagian bawah tabung tes.


Enterobacter cloacaeexhibits fermenation of glucose and gas production but no sulfur reduction.

This would be read K/A,G.
Staphylococcus aureusexhibits acidic fermentation.

This would be read A/A.
Salmonella typhimuriumferments glucose & reduces sulfur.



Would be read K/A, H2S.
Micrococcus luteus uses the amino acids and does not grow in the butt of the slant.

This would be read K/NC.
Bacillus megateriumfermented sugars but didn't grow in the anaerobic area of the butt.

This would be read A/NC.
Enterobacter aerogenesfermented the sugars but turned to the amino acids.

This would be read as K/A.


Results (slant/butt)
Symbol
Interpretation
Red/yellow
K/A
Glucose fermentation only; Peptone catabolized
Yellow/yellow
A/A
Glucose and lactose and/or sucrose fermentation
Red/red
K/K
No fermentation; Peptone catabolized
Red/no color change
K/NC
No fermentation; Peptone used aerobically
Yellow/yellow with bubbles
A/A,G
Glucose and lactose and/or sucrose fermentation; Gas produced
Red/yellow with bubbles
K/A,G
Glucose fermentation only; Gas produced
Red/yellow with bubbles and black precipitate
K/A,G, H2S
Glucose fermentation only; Gas produced; H2S produced
Red/yellow with black precipitate
K/A, H2S
Glucose fermentation only; H2S produced
Yellow/yellow with black precipitate
A/A, H2S
Glucose and lactose and/or sucrose fermentation; H2S produced
No change/no change
NC/NC
No fermentation

A=acid production; K=alkaline reaction; G=gas production; H2S=sulfur reduction



Intinya E.coli tuh kalo
TSIA : lerengnya kuning ato merah, dasarnya kuning, terbentuk gas
SIM : sulfida bisa +/- udah gitu indol juga bisa +/-, udah gitu bisa motil ato g
SC selalu +

No comments:

Post a Comment